机器真的可以直接测量核酸的真实纯度和浓度吗?
我们这个行业内的误解是:机器可以测量核酸的纯度和浓度,就不用跑电泳了。
有些厂家为了推销分光光度计机器推广了这个不太真实的概念。
让我们一起来看看这个质粒提取后-琼脂糖凝胶电泳结果分析实验的对比
从结果分析:从抽提的质粒浓度上来看,T公司试剂盒提取的质粒浓度要普遍高于Aidlab的试剂盒。但在质粒跑胶的亮度对比上,两者抽提的质粒跑胶亮度没有较大差距。
所以T公司试剂盒提取的结果检测的OD值实为虚高。
真实情况是分光光度计包括Nanodrop是无法通过测量OD比值来判断核酸的全面纯度的,od260:280比值判断的只是蛋白残留的纯度,od260:230比值判断的只是盐离子的纯度,而核酸里面还有其它各种杂质可能残留,这些杂质,机器是没法测量出来的,但是杂质也有吸光值OD,就会干扰机器的正确检测核酸浓度。
机器测量的是样品的总吸光值,然后换算成浓度,如果样品是100%纯的核酸,机器确实可以把所有的吸光值换算成浓度,这才是真实的浓度。但是如果样品里面有杂质呢?机器测量的总吸光值里面还含有杂质的吸光值,但是机器无法区分,还是会把总吸光值换算成浓度,这个时候测量的浓度还包括了杂质带来的吸光值的浓度,最后导致机器测量的浓度比真实核酸浓度高,OD值实际是虚高了。
如果使用这样有杂质的质粒有什么后果呢?
1、质粒浓度低
2、含有杂质导致无法准确定量,可能造成不准确的实验结果。
3、含有杂质可能抑制下游的酶切和PCR等酶反应,造成实验不准。
DNA/RNA质量评价的两大方法
一、“跑电泳”是金标准!
跑电泳可以得到很多信息:是否降解,是否有DNA或者蛋白污染,是否有杂带。
跑电泳可以通过DNA Marker估算浓度,更易把控后续实验的准度!
二“测OD值”仅仅是辅助手段
只有在RNA不降解,无污染的情况下。
测量的OD值才是真实的!
（编辑：Admin)
